益气温阳活血化瘀中药对心力衰竭大鼠心肌细胞葡萄糖转运蛋白4 的干预作用研究

益气温阳活血化瘀中药对心力衰竭大鼠心肌细胞葡萄糖转运蛋白4 的干预作用研究内容摘要：

・２０３・ ±垦皇堕堡笙盒叁塾盘查！！！！生！旦笙！！鲞筮！塑曼垒垫』！堡Ｍ里丛曼坐璺！堡！！竺！！！！！！！ｙ！！！！！！堕旦：兰 论著・ 益气温阳活血化瘀中药对心力衰竭大鼠 心肌细胞葡萄糖转运蛋白４的干预作用研究 韩世飞１，曾雪滨１，徐淑乐１，何建成２，胡元会３，崔英凯１，张刚１，杨梅１ （１．解放军二五二医院心内科，河北保定０７１０００， ２．上海中医药大学基础医学院， 上海２０１２０３，３．中国中医科学院广安门医院，北京１０００５３） 【摘要】 研究中药复方制剂心复康口服液对压力负荷型充血性心力衰竭（ＣＨＦ）大鼠心肌细胞葡萄 目的 糖转运蛋白４（ＧＬＵＴ４）的影响，探讨中药改善心肌能量代谢的机制。方法将６０只ＳＤ大鼠随机分为假手术 组（ＳＨ）、腹主动脉缩窄模型组（ＣＡＡ）、心复康口服液治疗组（ＸＦＫ），每组２０只。复制压力负荷型ＣＨＦ大鼠模 型，分别于药物干预６周、１０周时检测各组大鼠心功能参数、心肌细胞ＧＬＵＴ４蛋白表达。结果制模６周、ｌｏ 周时ＣＡＡ组大鼠心功能明显降低，左室舒张期末压（ＬＶＥＤＰ）、左室重量指数（ＬＶＭＩ）显著升高，左心室内压 上升、下降最大变化速率（士ｄｐ／ｄｔ ｍａｘ）显著下降（Ｐ均＜ｏ．０１）ｔＸＦＫ组大鼠心功能各项指标较ＣＡＡ组明显 改善（Ｐ均＜０．０１），１０周时ＬＶＥＤＰ、ＬＶＭＩ下降及＋ｄｐ／ｄｔ ｍａｘ升高较６周时更为显著（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜ ０．０１），而一ｄｐ／ｄｔ ｍａｘ则无明显变化。ＣＡＡ组６周与１０周时ＧＬＵＴ４较ＳＨ组显著下降ＩＸＦＫ组较ＣＡＡ组显 著升高（Ｐ均＜０．０１），且１０周时ＧＬＵＴ４蛋白表达较６周时明显升高（Ｐ＜ｏ．０１）。结论具有益气温阳、活血 化瘀作用的心复康口服液对压力负荷型ｃＨＦ大鼠心功能及心肌细胞ＧＬＵＴ４表达具有明显的改善作用。 【关键词】心复康口服液；葡萄糖转运蛋白４，心力衰竭，充血性；心肌能量代谢 文献标识码：Ａ 中圈分类号：Ｒ２８５．５，Ｒ２５６．２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｏｎｇｅｓｔｉｖｅ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｙｕａｎ—ｈｕｉ，ＣＵＩ Ｙｉｎｇ－ｋａｉ，ＺＨＡＮＧ Ｇａｎｇ，ＹＡＮＧ Ｍｅｉ．＊Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ ｔ ＣＡＯ ｌｉｑｕｉｄ（心复康口服液）ｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｅｆｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｔｈｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ｔｈｅ ｗｉｔｈ ｒａｔｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｏｖｅｒｌｏａｄ－ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｅｎｅｒｇｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ． ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｃｏｎｇｅｓｔｉｖｅ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ（ＣＨＦ）ｗｅｒｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ｃｏｎｓｔｒｉｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｂｄｏｍｉｎａｌ ａｂｄｏｍｉｎａｌ ａｏｒｔａ（ＣＡＡ）ｍｏｄｅｌ ｗｅｒｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｓｔｕｄｙ ｓｈｏｗｅｄ ｑｕａｎｔａ ｌｉｑｕｉｄ（ＸＦＫ）ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ（ｅａｃｈ， ＧＬＵＴ４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｍｕｓｃｌｅ ｉｎ ｏｆ ｅｖｅｒｙ ｇｒｏｕｐ ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ ｏｆ ６ｔｈ ａｎｄ ｌＯｔｈ ｗｅｅｋ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｄｒｕｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ａｔ ｔｈａｔ ｉｎ ａｎｄ Ｘｉｎｆｕｋａｎｇ ｏｒａｌ ｇｒｏｕｐ 露＝２０）．Ｔｈｅ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｏｒｔａ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ（ＳＨ）ｇｒｏｕｐ， ｐａｒｔｌｙ．Ｓｉｘｔｙ Ｓｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ＣＡＡ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｃａｒｄｉａｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｌｅｆｔ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｐｒｅｓｓｕｒｅ（ＬＶＥＤＰ）ａｎｄ ｌｅｆｔ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｍａｓｓ ｉｎｄｅｘ（ＬＶＭＩ）ｗｅｒｅ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｅｎｄ—ｄｉａｓｔｏｌｉｃ ｍａｘｉｍｕｍ ａｓｃｅｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇ ｃｈａｎｇｉｎｇ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＴＣＭ）Ｘｉｎｆｕｋａｎｇ ｏｒａｌ ４（ＧＬＵＴ４）ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｍｕｓｃｌｅ ｉｎ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ ａｎｄ ｓｔｕｄｙ ｉｔｓ ｃｏａｒｃｔａｔｉｏｎ ｏｆ ①Ｔｈｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ∥ＰＬＡ， Ｘｕｅ－ｂｉｎ，Ｅｍａｉｌ：ｃｘｂ２５９＠ｙａｈｏｏ．ｃｏ，雄．佣 ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ｒａｔｓ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，２５２ Ｄ刃ＤＤＤ，Ｈｅｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ Ｂａｏｄｉｎｇ ｏｆ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８—９６９１．２００９．０４．００３ ｌｉｑｕｉｄ（心复康口服液）ｏｎ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ４ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｍｕｓｃｌｅ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ＨＡＮ Ｓｈｉ一崩。，ＣＡＯ Ｘｕｅ－ｂｉｎ，ＸＵ Ｓｈｕ－ｌｅ，ＨＥ Ｊｉａｎ－ｃｈｅｎｇ，ＨＵ Ｘｉｎｆｕｋａｎｇ ｏｒａｌ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ（ａｌｌ Ｐ＜０．０１）．Ｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌｅｆｔ ｉｎｔｒａ－ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｒａｔｅｓ ｔｈｅ ＸＦＫ ｇｒｏｕｐ ａｌｌ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｐｒｅｓｓｕｒｅ（士ｄｐ／ｄｔ ｍａｘ）ｗａｓ ｃａｒｄｉａｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ＣＡＡ ｇｒｏｕｐ（ａｌｌ Ｐ＜Ｏ．０１）Ｉ ｔｈｅ ＬＶＥＤＰ ａｎｄ ＬＶＭｌ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ａｎｄ＋ｄｐ／ｄｔ ｍａｘ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ＸＦＫ ｐｏｉｎｔ（Ｐ＜０．０５ ｔｈｅ ６ｔｈ ｗｅｅｋ ｏｒ Ｐ＜０．０１），ｗｈｉｌｅ ｔｈｉｓ —ｄｐ／ｄｔ ｍａｘ（Ｐ＞ｏ．０５）．②Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ＸＦＫ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ａｔ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ＣＡＡ ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ ｏｆ ６ｔｈ ａｎｄ １０ｔｈ ａｔ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｄｉｄ ｗｅｅｋ ｉｎ ｔｈｅ ｎｏｔ ａｔ ｇｒｏｕｐ ｓｈｏｗ ａｎｙ ｔｈｅ ｌＯｔｈ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ ｏｆ ６ｔｈ ａｎｄ ｌＯｔｈ ｗｅｅｋ，ＧＬＵＴ４ ｇｒｏｕｐ（ｂｏｔｈ Ｐ＜Ｏ．０１）．Ｔｈｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ＸＦＫ ａｔ ｏｂｖｉｏｕｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｇｒｏｕｐ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ｏｆ ＧＬＵＴ４ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０１）． ＴＣＭ Ｘｉｎｆｕｋａｎｇ ｏｒａｌ ｌｉｑｕｉｄ ｐｏｓｓｅｓｓｉｎｇ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｉｎｇ ｑｉ（益气），ｗａｒｍｉｎｇ Ｙａｎｇ（温阳）， ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｂｌｏｏｄ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｍｏｖｉｎｇ ｂｌｏｏｄ ｓｔａｓｉｓ（活血化瘀）ｃａｎ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｉｍｐｒｏｖｅ ｃａｒｄｉａｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅ ＧＬＵＴ４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｃａｒｄｉａｃ ｍｕｓｃｌｅ ｏｆ ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｘｉｎｆｕｋａｎｇ ｏｒａｌ ｌｉｑｕｉｄ｝ｇｌｕｃｏｓｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ 　万方数据 ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｏｖｅｒｌｏａｄ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｃａｒｄｉａｃ ｆａｉｌｕｒｅ． ４；ｃｏｎｇｅｓｔｉｖｅ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ；ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｅｎｅｒｇｙ ‘２０４。 生垦生亘匿缝金叁墼塑查！！！！堡！星蔓！！查筮！塑璺堕ｉ翌！堕丛旦丛曼！堡堡！堡！』尘！！！！！！坠！：！！！塑！：！ 心力衰竭（心衰）时心肌细胞利用脂肪酸减少， 肌组织，加１ ｍｌ组织裂解液（ＲＩＰＡ）和１０ ｐｌ苯甲基 利用葡萄糖供能增多。缺血细胞摄取葡萄糖量的高 磺酰氟（ＰＭＳＦ），冰浴中匀浆，４℃、２０ ０００×ｇ离心 低与葡萄糖通过细胞膜转运率相关，而葡萄糖的转 ３０ 运则主要依赖葡萄糖转运蛋白（ＧＬＵＴ）来进行，而 度。各组取等量蛋白匀浆液，调节上样量一致，对照 在心肌细胞中，ＧＬＵＴ主要为ＧＬＵＴ４。本研究中通 孔加预染蛋白Ｍａｒｋｅｒ（上海康成生物工程有限公 过观察具有益气温阳、活血化瘀功效的中药制剂心 司），然后进行十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电 复康口服液对充血性心衰（ＣＨＦ）大鼠心功能及心 泳（ＳＤＳ—ＰＡＧＥ）分离蛋白，经过电转膜、封闭、加入 肌细胞ＧＬＵＴ４蛋白表达的影响，探讨心复康口服 小鼠抗大鼠ＧＬＵＴ４单抗稀释液孵育、洗膜、加入羊 液治疗ＣＨＦ的可能机制。 抗兔多抗、再洗膜等过程后，用增强化学发光法 １材料与方法 （ＥＣＬ）显像曝光，经扫描凝胶成像仪分析，检测蛋白 １．１动物分组及模型制备：雄性ＳＤ大鼠６０只，体 表达水平，以ＧＬＵＴ４／三磷酸甘油醛脱氢酶 重（２２５士２５）ｇ，由河北医科大学实验动物中心提供。 （ＧＡＰＤＨ）进行定量分析。 按随机数字表法分为假手术组（ＳＨ）、腹主动脉缩窄 １．４统计学处理：实验数据用ＳＰＳＳ １１．０统计软件 模型组（ＣＡＡ）、心复康口服液治疗组（ＸＦＫ），每组 处理。计量资料以均数士标准差（ｚ士ｓ）表示，采用方 ｍｉｎ。取上清液，以ＢＣＡ法测定上清液中蛋白浓 ２０只。按文献［１］方法制备压力负荷型左室肥厚 差分析，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 ＣＨＦ大鼠模型。 ２结果 １．２主要实验材料：心复康口服液（由人参、黄芪、 ２．１心功能参数结果（表１）：６周、１０周时ＣＡＡ组 丹参、附子、淫羊藿、灵芝等药物组成）由本院制剂中 ＬＶＥＤＰ、ＬＶＭＩ较Ｓ