正交试验法优选麻黄的提取工艺研究

正交试验法优选麻黄的提取工艺研究内容摘要：

747 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月 样品测定: 取 3 种不同来源的板蓝根多糖, 按照 李糖、 甘露糖和半乳糖等多种单糖。结果的差异可 上述方法进行样品制备和测定, 计算得到木糖、 阿拉伯 能是因为文献采用了不同来源的板蓝根药材所含多 糖、 葡萄糖、 鼠李糖、 甘露糖、 组成半乳糖物质量的比分 别为( n= 3) : 1 号 1 69 9 04 53 1 1 00 1 67 糖种类不同, 也可能是文献采用的薄层色谱法分辨 率不理想造成了结果的差 异。毛细管 电泳法柱效 6 51; 2 号 0 65 5 79 29 5 1 00 高、 分离能力强, 用于分析多糖的单糖组成, 专属性 2 5 3 28 4 07; 3 号 1 12 3 63 19 8 1 00 1 88 2 64。 高, 可靠性强。 3 讨论 虽然实验结果表明 3 个不同来源板蓝根多糖的 参考文献: 单糖组成类似, 但其组成比例差异显著。中药内在 质量的稳定性是实现中药质量控制的前提, 中药标 准化研究急需突破。 [ 1] [ 2] 郁, 孙毓庆 板蓝根化学成分、药理及质量控制研 究进展 [ J ] 沈阳药科大学学报, 2003, 20( 6) : 455 459 雷黎明, 潘清平 板蓝根化学、药理、质量及提取方法的研究进 展 [ J] [ 3] 时珍国医国药, 2007, 18( 10) : 2578 2580 吴寿金, 赵 泰, 秦永奇 现代中草药成分化学 [ M ] 北京: 中 国医药科技出版社, 2002 曾选择硫脲、 苯巴比妥、 水杨酸等作为内标物, 鉴于样品成分复杂, 最终选用硫脲作为内标物, 保留 肖珊珊, 金 [ 4] 马 莉, 唐健元, 李祖伦, 等 研究 [ J] 时间适宜, 且其他成分对选取的内标电泳峰无干扰。 马莉等[ 4] 报道通过薄层色谱分析, 所得到板蓝 [ 5] 根多糖的 4 种组分均由单一木糖组成。而本实验结 [ 6] 王志远, 戴 玲, 朱业 云, 等 性质及抗氧化活性研究[ J ] 陈 蕾, 吴 板蓝根多糖分离纯化及其性质的 中草药, 2007, 38( 8) : 1143 1146 昊 半杖 莲酸性 多糖 S BPs 的纯 化、 中草药, 2009, 40( 5) : 728 731 多糖降 解方法的 研究进展 [ J ] 中 华中医 药 学刊, 2008, 26( 1) : 133 135 果表明板蓝根多糖含有木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠 正交试验法优选麻黄的提取工艺研究 吴晓云 ( 杭州市第三人民医院 药剂 科, 浙江 杭州 310009) 摘 要: 目的 筛选 50% 乙醇回流法 提取麻黄中盐酸麻黄碱的最佳工艺。方法 采用正交试验法, 以提取次数、提 取时间、 溶媒用量为因素, HP L C 法测定盐酸麻黄碱并作 为评价指标。采 用 Dikma D iamonsil C18 柱( 250 mm 4 6 mm, 5 m) ; 流动相: 0 2% 磷酸水溶液 乙腈( 96 4) ; 检 测波长: 205 nm; 体积流量: 1 mL/ min。结果 盐 酸麻黄 碱 在 0 488~ 3 416 g 线性关 系良好, 平均回收率为 100 26% , RSD 为 2 17% 。提取次数对 盐酸麻黄碱的提取 率有 显著性影响。结论 麻黄中盐酸麻黄碱的最佳提取工艺为 50% 乙醇回流提取 2 次, 每次 2 h, 7 倍量 溶媒。 关键词: 麻黄; 盐酸麻黄碱; 提取工艺; 正交试验 中图分类号: R284 2 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2010) 05 0747 03 麻 黄 为 麻 黄 科 植 物 草 麻 黄 Ep hedr a si ni ca P erkin Elm er Series 200 高 效 液 相 色 谱 仪 Stapf、中麻黄 E intermedia Schr enk et C A M ey ( P erkinElmer 公司 ) ; P er kin E lmer L anmda 20 紫 或木贼麻黄 E equi seti na Bag 的干燥草质茎。味 外/ 可见分 光光 度仪 ( P er kin Elmer 公 司) ; Dikma 辛、 微苦, 性温, 具发汗散寒、 宣肺平喘、利水消肿之 功效[ 1] 。主要成分为 盐酸麻黄碱、盐酸 伪麻黄碱。 Diamo nsil C 18 柱 ( 迪 马公司) ; AB204 天平( M ett ler T o lrd 公司) 。 S 电子 分析 本实验以盐酸麻 黄碱为指标, 采用 H P LC 法测定, 乙腈( 色谱纯, T EDIA 公司) ; 盐酸麻黄碱对照 利用正交试验设计, 以 50% 乙醇为溶媒加热回流提 取, 考察影响盐酸麻黄碱提取率的因素, 筛选麻黄的 品 ( 购 自 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所, 批 号 722 200006) ; 麻黄药材购自萧山市医药有限责任公司中 最佳提取工艺条件。 药分公司, 经浙江省中药研究所药材资源室鉴定为 1 仪器与试药 草麻黄。 收稿日期: 2009 10 23 作者简介: 吴晓云( 1981 ) , 女, 浙江庆元人, 中药师, 2002 年毕业于浙江中医药大学药学系, 从事中药成分 测定及中药不 良反应研究。T el : ( 0571) 87823122 E mail : yaojianmeng@ 126. com 748 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 5 期 2010 年 5 月 2 方法与结果 2 1 RSD 为 1 88% 。 正交试验设计因素与水平: 以盐酸麻黄碱的量 4 回收率试验: 精密称取 6 号样品 0 5 g , 取 5 2 2 9 为指标, 选用 L 9 ( 3 ) 正交试验表, 对提取次数、提取 时间、 溶媒用量进行考察, 因素与水平见表 1。 份, 置 10 mL 量瓶中, 分别加入 0 224 mg/ mL 盐酸 表 1 因素水平 行测定, 计 算得 平 均回 收 率为 100 26% , RSD 为 2 17% 。 Table 1 水平 Factors and levels 因 素 麻黄碱对照品溶液 3 m L, 制成供试品溶液, 依法进 样品测定: 取 1~ 9 号样品, 制备供试品溶 2 2 10 A 提取次数/ 次 B 提取时间/ h C 溶媒用量/ 倍 1 2 1 2 1 2 5 7 3 3 3 9 [ 2] 2 2 盐酸麻黄碱的 H P L C 法测定 2 2 1 测定波长的 确定: 取盐酸麻黄碱对 照品适 量, 加水溶解, 稀释至一定刻度, 置紫外/ 可见分光光 度仪中, 在 190~ 400 nm 扫描, 绘制紫外吸收光谱。 结果表明盐酸麻黄碱在 205 nm 处有最大吸收。因 液, 用 0 45 m 的微孔滤膜滤过, 取续滤液, 按上述 色谱条件测定色谱峰面积, 计算样品中盐酸麻黄碱 提取率( 盐酸麻黄碱提取率= 样品中盐酸麻黄碱总 量/ 投入药材中盐酸麻黄碱总量 2 3 提取方法: 取麻黄( 切成约 1 cm 的小段) 100 g, 按 L 9 ( 34 ) 正交试验表设计分别进行提取, 所得的提 取液经合并、 滤过, 浓缩至一定体积, 作为 1~ 9 号样 品。结果见表 2。 此, 将测定波长定为 205 nm。 2 2 2 色谱条件: Dikm a Diamonsil C18 色谱柱( 250 mm 4 6 mm, 5 m , 迪马公司) ; 流动相: 0 2% 磷 酸水溶液 乙腈( 96 表2 试验号 A B C 提取率/ % 1 2 1 1 1 2 1 2 1 2 35 87 48 11 3 4 5 1 2 2 3 1 2 3 2 3 3 3 1 57 65 67 03 63 76 6 7 2 3 3 1 1 3 2 2 66 25 71 18 8 9 K1 K2 3 3 141 63 2 3 174 08 1 2 164 57 3 1 165 40 62 45 65 77 197 04 199 40 57 77 174 32 189 67 15 59 180 91 192 59 28 02 185 54 187 13 21 73 4) ; 体积流量: 1 m L/ min; 检测 2 2 3 对照品溶液的制备: 精密称取真空干燥至恒 重的盐酸麻黄碱对照品适 量, 加流动 相溶解, 制成 150 g/ m L 溶液, 作为对照品溶液。 供试 品溶液 的制 备: 取 1 ~ 9 号 样品各 约 1 0 mL , 分别精密称定, 置 10 mL 量瓶中, 加 5% 甲 醇至刻度, 超 声提取 20 min, 取出, 放 冷, 摇 匀, 用 0 45 m 的微孔滤膜滤过, 取续滤液, 即得。 2 2 5 线性范围考察: 精密称取盐酸麻黄碱适量, 置 50 mL 量瓶 中, 加流 动相 溶解 分别 制 成 48 8、 97 6、 146 4、 195 2、 224 0、 292 8、 341 6 g/ m L 的 L9 ( 34 ) 试验安排和结 果 Arrangement and results of L9 ( 3 4 ) orthogonal test Table 2 波长: 205 nm; 柱温: 30 ; 进样量: 10 L 。理论塔 板数按盐酸麻黄碱计不低于 3 000。 2 2 4 100% ) 。 K3 R 可知在 3 个因素中, 对盐酸麻黄碱提取率的影 响程度依次为: A> B> C。据测定结果并考虑省时 节能、降 低 成本 的角 度, 优 选 出最 佳 提取 工 艺为 对照品溶液, 分别进样 10 L , 测定峰面积, 以进样 A 2 B 2 C 2 , 即 50% 乙醇回流提取 2 次, 每次 2 h, 7 倍 量为横坐标, 峰面积为纵坐标, 求得回归方程为 Y = 566 680 X - 18 313, r = 0 999 8, 结果表明盐酸麻黄 量溶媒。 2 4 工艺验证试验: 取同批麻黄药材( 切成约 1 cm 碱在 0 488~ 3 416 g 呈良好的线性关系。 的小段) 3 份, 每份 100 g , 分别按照最佳提取