DCE-MRI 评价中药康莱特抑制人结肠癌裸鼠皮下移植瘤血管生成的研究

DCE-MRI 评价中药康莱特抑制人结肠癌裸鼠皮下移植瘤血管生成的研究内容摘要：

CHINESE JOURNAL OF CT AND MRI,SEPT.2016, Vol.14, No.9 Total No.83 The Value of Dynamic Contrast-enhanced MRI in Assessing Anti-angiogenic Effect of KLT in Human Colon Cancer Transplanted Subcutaneously in Nude Mice* 实验研究 DCE-MRI评价中药康 莱特抑制人结肠癌 裸鼠皮下移植瘤血 管生成的研究* 新疆医科大学第二附属医院影像中 心 (新疆 乌鲁木齐 830063) 陈 星 王云玲 赵丽萍 邓佳敏 王 红 贾文霄 【摘要】目的 探讨动态增强磁共振评价 中药康莱特抑制人结肠癌裸鼠皮下移植瘤 血管生成的应用价值。方法 建立人型结 肠癌HT-29裸鼠皮下移植瘤模型48只，随 机分为实验组(n=24)和对照组(n=24)， 实验组每日给予康莱特0.5mg/(20g.d) 腹腔注射，对照组每日腹腔注射等量生 理盐水，分别于治疗前、治疗后7天、14 天、21天进行DCE-MRI扫描，并且在治疗 后的3个时间节点扫描结束后分别处死8 只取肿瘤组织进行病理免疫组化检查， 动态观察并分析反映肿瘤血管功能的参 数值9对比剂容积转运常数K trans、速率常 数Kep、血管外细胞外容积分数Ve、血浆空 间容积分数V p，并与同期肿瘤组织MVD表 达结果进行相关性分析。结果 随时间延 长，实验组K trans 及K ep 值逐渐下降，对照 组K trans及Kep值逐渐上升，均存在统计学 差异(P＜0.05)。治疗前实验组与对照组 K trans 及K ep 值比较差异无统计学意义，治 疗后的3个时间节点实验组Ktrans及Kep值分 别明显低于对照组，均存在统计学差异(P ＜0.05)。实验组及对照组给药后三个时 间节点的Ktrans及Kep值均与MVD呈正相关(P 均＜0.05)。结论 康莱特对人结肠癌异体 移植瘤具有良好的抑制作用，DCE-MRI技 术所得到的动态变化的K trans 及K ep 值可被 看做是评价结肠癌早期化疗效果的定量指 标。 【关键词】动态增强磁共振；移植瘤；康 莱特；结肠癌；裸鼠 【中图分类号】R246.5 【文献标识码】A 【基金项目】国家自然科学基金项目 (编号：81360214) DOI:10.3969/j.issn.16725131.2016.09.001 通讯作者：贾文霄 CHEN Xing, ZHAO Li-ping, WANG Hong, et al., Department of Radiology, the Second Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830063, Xinjiang Autonomous Region, China [Abstract] Objective To investigate the applicated value of dynamic contrast-enhanced MRI(DCE-MRI) in evaluating anti-angiogenic effect of Chinese medicine KLT in human colon cancer transplanted subcutaneously in nude mice. Methods 48 human colon cancer models of HT-29 which made by nude mice were established, and divided into experimental group and control group randomly, peritoneal cavities of the experimental group were injected KLT with dose 0.5mg/20g per day, and the control group were injected with the same volumes of saline in the same locations, DCE-MRI were performed before therapy and 7 days, 14 days, 21 days after treatment. 8 mouses were sacrificed respectively after MRI scanning in three time points, and pathological immunohistochemical examination were done. The following parameters(Ktrans, Kep,Veand Vp) which reflecting the tumor blood vessel functions were observed dynamically. The correlations between the changes of tumor tissue MVD and parameter values at each time point were analyzed. Results Ktrans and Kep of the experimental group decline and the control group rise gradually with the extended of time, the statistical differences in the two groups were existed(P＜0.05).There were no statistically difference between Ktrans and Kep of the two groups before treatments, however, Ktrans and Kep of the experimental group were obviously lower than the control group at each time point after treatments which were statistically significances(P＜0.05). Ktrans and Kep of the two groups after treatments were positively correlated with corresponded MVD at each time point(P ＜0.05). Conclusion KLT could inhibit the development of human colon cancer xenograft significantly, the dynamic changes of Ktrans and Kep values of DCE-MRI technology can be considered as a quantitative indexes for evaluating early colon cancer chemotherapy. [Key words] Dynamic Contrast-enhanced MRI; Transplanted Tumor; Kang Laite; Colon Cancer; Nude Mice 　　肿瘤的生长与血管生成关系密切，通过检测肿瘤血管生成，有助 [1] 于判断抗肿瘤药物疗效。相关文献 证实，动态增强磁共振(DCE-MRI) 技术获得的定量参数可以作为影像生物学标记物无创性的评价肿瘤血 管生长。中药康莱特(kang laite,KLT)是从中药薏苡仁中提取的一种 脂肪乳剂，有效成分是薏苡仁油，康莱特对多种移植性肿瘤及人体癌 细胞移植于裸鼠的癌体均有较明显的抑癌作用，目前应用分子影像学 的方法评价康莱特治疗肿瘤的报道比较少，本实验通过动态增强磁共 振定量分析康莱特对裸鼠结肠癌皮下移植瘤血管生成的抑制作用，探 讨DCE-MRI对评价抗肿瘤血管生成药物疗效的价值。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及细胞株 SPF级BALB/C-nu裸鼠48只，雌雄各半， 6～8周，18～20g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，符合医 学动物实验标准。人型结肠癌HT-29细胞株，购于中科院上海细胞库， ·1 中国CT和MRI杂志　2016年9月 第14卷 第9期 总第83期 　　1.4 DCE-MRI图像处理与数 据分析 将DCE-MRI图像转化格 式后输入Biomap后处理软件内， 在腹主动脉强化最明显处取感兴 趣区R1和R2，合并之后由Biomap 软件获得裸鼠的动脉输入功能函 数(arterial input function， AIF)，在移植瘤强化最明显处划 取感兴趣区R3(图1)，在AIF的基 础上自动生成反映肿瘤微血管通 透性的各项参数，即对比剂容积 trans 转运常数K ，血管外细胞外容 积分数Ve，血浆空间容积分数Vp， trans 并根据公式(Kep=K /Ve)计算出速 度常数Kep(图2)。 　　1.5 病理组织学检查及分 析 48只裸鼠肿瘤组织进行常规 石蜡包埋及切片，用CD31单克隆 抗体(购自中杉金桥)进行标记， 实验步骤参照SP试剂盒说明书。 判定标准采用目前国际上常用的 Weidner改进式方法：即先在低倍 镜(×100)下扫视整个玻片，找出 微血管密度最大的“热点”后， 变换高倍镜(×200)观察并计数。 任何被抗体染成棕色的单个细胞 或细胞团(图3)，只要它与周围的 微血管、肿瘤组织及其他结缔组 织成分有清楚的分离，都作为1条 可计数的血管，排除肿瘤内硬化 区以及与肿瘤交界处软组织内的 经传代扩增后配制成细胞浓度为 6 1×10 个/ml的悬液。本实验经新 疆医科大学实验动物使用与伦理 管理委员会批准。 　　1.2 结肠癌裸鼠移植模型建 立及分组 取细胞悬液0.2mL接 种于每只裸鼠左后肢背部皮下， 将48只裸鼠随机分为2组，每组 24只，肿瘤接种后第15天开始给 药，实验组腹腔注射康莱特注射 液0.5mg/(20g.d)(浙江康莱特药 业有限公司生产)，连续给药21 天，对照组腹腔注射等量生理盐 水，连续注射21天。 　　1.3 DCE-MRI扫描设备及方法 采用飞利浦1.5T常规临床超导MRI 扫描仪，线圈采用实验动物专用 的25mm专用显微线圈