HPLC 法检测降糖中成药添加磺酰脲类药物

HPLC 法检测降糖中成药添加磺酰脲类药物内容摘要：

现代中药研究与实践2010年第24卷第6期 Chin Med J Res Prac,2010 Nov.,Vol.24 No.6 — 64 — [2] 刘卓伟，叶志文，张晓骑，等 . 毛鸡骨草地上部分的化学成分 [J]. 中国 [6] 钟正贤，李燕婧，陈学芬，等 . 相思子碱的药理作用研究 [J]. 中医药导报， 2009，15（1）：8-10. 天然药物，2008，6（6）：415-417. [3] 卢文杰，陈家源，韦 宏，等 . 毛相思子中的异黄酮类成分 [J]. 中草药， [4] 卢文杰，田小雁，陈家源，等 . 毛鸡骨草化学成分的研究 [J]．华西药 [5] 史海明，温 晶，屠鹏飞 . 毛鸡骨草的化学成分研究 [J]. 中草药，2006， [7] 陈学芬，钟正贤，李燕婧，等 . 海帕刺桐碱药理作用的研究 [J]. 中国中 [8] 黄 平，莫 虎，马雯芳，等 .RP-HPLC 法同时测定鸡骨草药材中的相思 医药科技，2009，16（5）：372-373. 2004，35（12）：1331-1333. 子碱和下箴刺桐碱 [J]. 药物分析杂志，2009，29（10）：1702-1704. 学杂志，2003，18(6) ：406-408． 37（5）：658-660. HPLC 法检测降糖中成药添加磺酰脲类药物 潘广洲，孙红刚 （山东省聊城市药品检验所，山东 聊城 252000） 摘要 ：目的 建立降糖中成药添加磺酰脲类药物的 HPLC 检测方法。 方法 采用色谱柱为 Diamonsil ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为 0.02 mol•L-1 醋酸铵缓冲液与乙腈梯度洗脱，流速为 1.0 mL•min-1， 检测波长为 235 nm。结果 选定的色谱条件下，磺酰脲类药物有很好的分离。结论 该法灵敏准确，可作 为检查降糖中成药中非法添加磺酰脲类药物的一种筛查手段。 关键词 ：HPLC ；降糖中成药 ；磺酰脲类 ；掺伪鉴别 中图分类号 ：R927.1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673-6427(2010)06-0064-02 Determination of Sulfa Drugs Added to the Hypoglycemic of Chinese Patent Medicine by HPLC PAN Guang-zhou, SUN Hong-gang (Liaocheng Institute for Drug Control, Liaocheng 252000, China) Abstract: Objective To establish a method for determining sulfa drug which may illegally adulterated into Chinese patent medicine by HPLC. Methods An HPLC method was performed on a Diamonsil ODS column(250 mm×4.6 mm，5 μm) with 0.02mol/L ammonium acetate and methanol as mobile phase.The flow rate was 1.0 mL•min-1. The detection wavelength was set at 235 nm. Results Sulfa drugs were separated well under the selected chromatographic conditions. Conclusion The method was sensitive and accurate. It could be used as a screening tool to determine sulfa drug illegally added to Chinese patent medicine. Key words: HPLC; hypoglycemic of Chinese Patent Medicine; sulfa drug; detection of adulteration 目前，糖尿病的治疗药物主要是化学药胰岛素 类、磺酰脲类、双胍类，但在市场上出现治疗糖尿病 的中成药中非法添加磺酰脲类、双胍类降糖化学药， 增加了糖尿病治疗用药的不安全因素。本文参考相关 文献 [1，2]，建立了一种同时检测在中成药中添加多种 磺酰脲类化学药物成分的方法，为检查降糖中成药中 非法添加降糖化学药的筛查提供依据。 1 仪器与材料 试药 ：格列本脲对照品 ( 中国药品生物制品检 收稿日期：2009-12-14 作者简介：潘广洲（1981-），硕士研究生。研究方向：中药学。 定所，批号 ：100135-0103)、格列美脲对照品 ( 中国 药 品 生 物 制 品 检 定 所， 批 号 ：100674-200301)、 格 列喹酮对照品 ( 中国药品生物制品检定所，批号 ： 100280-200301)、格列齐特对照品 ( 中国药品生物制 品检定所，批号：100269-200402)、格列吡嗪对照品 ( 中 国药品生物制品检定所，批号 ：100281-200602)。 样 品 ：参 芪 降 糖 胶 囊 ( 河 南 A 厂， 批 号 ： 080103)，消糖灵胶囊 ( 烟台 A 厂，批号 ：0708031)， 糖尿乐胶囊 ( 吉林 A 厂，批号 ：20080666)，格列本 脲 片 ( 山 西 A 厂，批 号 ：0807101)， 降 糖 甲 片 ( 吉 林 B 厂， 批 号 ：080602)， 参 芪 降 糖 胶 囊 ( 河 南 A 厂，批号 ：080611)，甘露消渴胶囊 ( 陕西 A 厂，批 现代中药研究与实践2010年第24卷第6期 Chin Med J Res Prac,2010 Nov.,Vol.24 No.6 — 65 — 号 ：0806021078)，降糖宁胶囊 ( 惠州 A 厂 , 批号 ： 061223)，糖脂宁胶囊 ( 广西 A 厂，批号 ：080901)， 降糖宁胶囊 ( 山西 A 厂，批号 ：080704)，糖尿灵片 ( 江西 A 厂，批号 ：08020302)，参芪降糖颗粒 ( 鲁南 A 厂，批 号 ：0703507)， 消 渴 降 糖 胶 囊 ( 黑 龙 江 A 厂，批号 ：080401)，消渴平胶囊 ( 吉林 C 厂，批号 ： 20080102)。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色 谱 柱 为 Diamonsil ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm) ；流动相 ：A 相为 0.02 mol•L-1 醋酸铵缓冲液 ； B 相 为 乙 腈 ；流 速 ：1.0 mL•min-1 ；检 测 波 长 ：235 nm ；柱温 ：室温。 2.2 溶液的配制 2.2.1 对 照 品 溶 液 的 制 备 分 别 精 密 称 取 格 列 本 脲、格列美脲、格列喹酮、格列齐特、格列吡嗪对照 品各 10 mg，用水∶乙腈（60 ∶ 40）溶解并稀释成 1.0 mg•L-1，摇匀，即得。 2.2.2 供试品溶液的制备 取样品适量 ( 样品说明书 所述一次口服剂量 )，精密称定，研细，置具塞子锥 形瓶中，加氯仿 20 mL 超声 30 min，过滤，取续滤 液蒸干， 用水∶乙腈（60 ∶ 40）溶解作为供试品溶液。 2.3 对照品色谱图的制备 分别精密量取各种对照品溶液 l mL，置于同一 10 mL 量瓶中，用水∶乙腈（60 ∶ 40）稀释至刻度， 进样量为 10 μL，采用梯度洗脱进样测定，流动相梯 度见表 l ；对照品色谱图见图 1。 表1 流动相梯度 Tab.1 Gradient of mobile phase 时间（min） 流动相A(%) 流动相B(%) 0 68 32 3 68 32 25 40 60 25.01 68 32 38 68 32 3 结果分析与讨论 3.1 结果分析 由图 1 可知本方法能够完全分离以上 5 种常见 的磺酰脲类降糖药物，且理论塔板数均达到 5 000 以 上，分离度良好。 由表 2 可知，本方法与液质联用色谱的确认结 表2 试验结果 Tab.2 Test results 样品编号及名称 生产单位 结果是否呈阳性 备注 1参芪降糖胶囊 河南A厂 080103 否 质谱验证阴性 2消糖灵胶囊 烟台A厂 0708031 是 处方含格列本脲 3糖尿乐胶囊 吉林A厂 20080666 是 质谱验证阴性 4格列本脲片 山西A厂 0807101 是 处方含格列本脲 5降糖甲片 吉林B厂 080602 否 质谱验证阴性 6参芪降糖胶囊 河南A厂 080611 是 质谱验证阴性 7甘露消渴胶囊 陕西A厂 0806021078 否 质谱验证阴性 8降糖宁胶囊 惠州A厂 061223 否 质谱验证阴性 9糖脂宁胶囊 广西A厂 080901 是 质谱验证阳性 10降糖宁胶囊 山西A厂 080704 否 质谱验证阴性 11糖尿灵片 江西A厂 08020302 否 质谱验证阴性 12参芪降糖颗粒 鲁南A厂 0703507 否 质谱验证阴性 13消渴降糖胶囊 黑龙江A厂 080401 否 质谱验证阴性 14消渴平胶囊 否 质谱验证阴性 吉林C厂 批号 20080102 （1. 格列吡嗪 2. 格列奇特 3. 格列本脲 4. 格列美脲 5. 格列喹哃） 图1 对照品溶液HPLC图 Fig.1 HPLC chromatogram of reference 果相比较，出现了 2 例假阳性，没有出现假阴性。 3.2 讨论 3.2.1 流动相成的选择 A 相曾选用不同浓度的磷 酸缓冲盐，效果均不理想，最后选用 0.02 mol•L-1 的 醋酸铵溶液，并且通过对不同厂家生产的色谱柱的应 用，均能实现满意的分离。 3.2.2 鉴别的专属性 需要注意的是由于液相色 谱定性鉴别专属性不强，而降糖药中成药品种繁多， 成分复杂，因而较容易产生假阳性，但是如果配有 DAD 检测器，就能够提高其定性鉴别的专属性。另 外，随着 LC-MS 技术的推广，使得液质联用色谱在 非法添加检测中往往成为最后的确认手段，而本文建 立的方法完全可以适用于 LC-MS。 参考文献 [1] 李雪靖，潘 颖，郄素会 . 降糖中成药中非法添加化学药品的 HPLC 法 [2] 刘起中，李慧义，杭太俊 . 中药降糖制剂中非法掺入的化