中华鳖太湖群体和台湾群体非特异性免疫功能比较

中华鳖太湖群体和台湾群体非特异性免疫功能比较内容摘要：

第 25 卷 第 1 期 水 生 生 物 学 报 V ol. 25, No . 1 20 01 年1 月 A CT A HYDROBIOL OGI CA SIN ICA Jan . , 2 0 0 1 研究简报 中华鳖太湖群体和台湾群体非特异性免疫功能比较 蔡完其 宫兴文 孙佩芳 ( 农业部水产增养殖生态、生理重点开放实验室; 上海水产大学 200090) COMPARISON ON THE FUNCTIONS OF NONSPECIFICITY IMMUNITY BETWEEN TAIHU LAKE POPULATION AND TAIWAN POPULATION OF SOFT SHELLED TURTLE ( TRION YX SINENSIS) CAI Wan qi, GONG Xing wen and SUN Pei fang ( L aborat ory of Ecology and Physi ology in A quacul t ure , M i ni stry of Agri cul tu re; Shanghai Fi sher ies Uni v ersi ty , 200090) 关键词: 中华鳖; 太湖群体; 台湾群体; 非特异性免疫; 功能 Key words: Soft shelled turtle; T aihu L ake population; T aiwan population; N onspecificity immu nity; Funct ion 中图分类号: 947. 1 文献标识码: A 文章编号: 1000- 3207( 2001) 01- 003 近年来, 我国养鳖业迅猛发展, 鳖种供不应求, 台湾稚 鳖大量 输入大 陆。由于引 进的稚 鳖多从非 正 规渠道进入, 未经检疫, 加之对其许多特性尚不清楚, 给养 殖和疾 病防治 等带来了 新问题。 养鳖者普 遍 [ 1, 2] 反映, 台湾鳖病害较多、死亡率较高。作者就此问题已有 过初步报 道 。最近作 者对太湖 鳖和台湾 鳖 的非特异性免疫功能进行了比较研究, 藉以判 断二者抗病力的差异, 以期能对水产养殖业有所裨益 。 1 1. 1 材料与方法 鳖 实验用的两种鳖来自上海市闵行区旗 忠养鳖场 的同一 温室的 不同鳖池。 太湖鳖 为从太湖 地 区收集的野生鳖的后代, 台湾鳖为从台湾购买 的仔鳖养成, 分别代表来自两个地区的 群体。每种鳖 各取 10 只, 共 20 只, 体重 300 400g, 健康活泼, 无发病史。采样前, 在同一池内暂养一周, 水温 28~ 30 , 以 消除环境因子对试验的影响。 1. 2 菌种 1. 3 血清制备 嗜水气单胞菌( A eromonas hydrop hila) , 由本实验室提供。 1. 4 抗体检查( 凝集反应) 断头取血, 滴于离心管中, 室温静置 2h, 3000r/ min 离心 20min, 取血清- 20 片, 混匀, 室 温置 10 保存。 试验 A: 在凹玻片上滴试验用鳖血清 1 滴, 生理盐水 1 滴, 菌液 1 滴, 轻摇玻 15min, 高倍镜观察有否凝集现象。试验 B: 阴性对照, 用生理盐水代替血清。 试验 收稿日期: 2000- 02- 03; 修订日期: 2000- 04- 04 基金项目: 上海市农委: 农科攻字( 97) 第 6- 02 号 作者简介: 蔡完其( 1939 ) , 女, 浙江鄞县人; 教授, 博士生导师; 研究方向为水产动物病理和抗病力选育 水 96 生 生 物 学 报 C: 阳性对照, 用被嗜气单胞菌感染过的鳖的血清 。参照蔡 完其等[ 3 5] 25 卷 的方法, 进行白细胞吞噬试验和红 细胞 C3b 受体花环试验。 1. 5 T 淋巴细胞活性 E 花环试 验 参照李振林 等 [ 6] 和杜念 兴等 [ 7] 的方 法。计算形成的 T 淋巴细 胞活 性 E 花环的百分率( 以一个 T 淋巴细胞上粘附三个或三个以上的 SRBC 为一个 花环) 。 1. 6 补体总量测定 测定仪器采用日本 Boehrinoer 公司的 Keysys 自动检测仪; 测定试剂采用与仪 器配 套的试剂盒; 测定方法采用 Wako Autokit CH 50法。 以上各项测定均采用配对法, 即任取一只 太湖鳖和一 只台湾 鳖为一 对, 共 10 组。 使用 P aired Sam ple t 检验对太湖鳖和台湾鳖间的差异进行显著性检验。 结果与讨论 2 2. 1 血清抗体检查 在血清抗体检 查试验 ( 凝 集反 应) 中, 试验 鳖的血 清和 阴性 对照试 验均 无凝集 现 象, 而阳性对照试验有凝集现象。 2. 2 太湖鳖和台湾 鳖免 疫功 能差 异 太湖 鳖和 台湾 鳖相 比, 在补 体总 量方 面差 异 不显 著( t = 0 77, < t 0. 05, 9= 1. 83) ; 在红细胞 C 3b受体花环 百分率( t= 1. 50, < t 0. 05, 9 = 1. 83) 和 T 淋巴 细胞活性 E 花环 百 分率( t= 1. 58, < t 0. 05, 9 = 1. 83) 两方面; 太湖群体略高于台 湾群体; 而在白细 胞吞噬百 分率方面, 太湖 群 体显著地高于台湾群体( t= 1. 94, > t 0. 05, 9= 1. 83) ( 表 1) 。 表1 Tab. 1 中华鳖太湖群体和台湾群体非特异性免疫功能比较 Comparison on t he funct ions of nonspecif ic immunit y betw een populations of Taihu Lake and Taiw an of sof t shelled t urt le 补体总量( Tot al amount of complement , / mL) 太湖鳖 14. 8 14. 8 14. 9 15. 1 14. 9 15. 1 15. 1 14. 9 15. 2 15. 1 14. 99 0. 15 台湾鳖 14. 7 14. 8 14. 6 15. 6 14. 8 15. 3 14. 9 14. 9 15. 1 15. 4 15. 01 0. 33 不显著( 0. 60< P< 0. 65) 红细胞 C 3b受体花环率( Eryt hrocyt e C 3b recept or rosett e, % ) 太湖鳖 7. 7 7. 6 7. 5 7. 4 9. 7 9. 7 6. 6 6. 2 4. 7 5. 2 7. 23 1. 65 台湾鳖 5. 7 8. 9 6. 6 6. 7 7. 6 6. 2 6. 0 5. 2 5. 3 4. 9 6. 46 1. 18 欠显著( 0. 05< P< 0. 10) T 淋巴细胞白细胞活性 E 花环率( Erythrocyt e act ive rosett e of T liymphocyt e, % ) 太湖鳖 9. 5 8. 0 8. 4 8. 3 10. 1 8. 3 11. 0 8. 9 11. 2 7. 9 9. 16 1. 23 台湾鳖 8. 1 10. 1 8. 3 7. 2 8. 5 7. 2 9. 4 7. 7 8. 2 7. 1 8. 19 1. 01 欠显著( 0. 05< P< 0. 10) 白细胞吞噬率( Phagocyt ic rat e of leucocyt e, % ) 太湖鳖 57. 5 48. 5 59. 5 46. 5 53. 4 44. 4 46. 8 51. 3 57. 1 52. 4 51. 74 5. 18 台湾鳖 52. 6 47. 2 42. 3 35. 8 35. 8 42. 2 41. 8 43. 6 42. 0 43. 2 42. 65 4. 90 显著( 0. 01< P< 0. 05) 2. 3 鉴于在中华鳖的各种病害中, 嗜水气单胞菌是常 见的病 原, 因 此, 在本试验 的血清 抗体检 查中, 首 先检查了试验用鳖的血清是否含有抗嗜水气单胞菌的抗体。经检验, 抗体反应均为阴性, 这就为其 它试 验尤其是白细胞吞噬试验的可行性提供了保证。白细胞 吞噬是 鳖的非 特异性免 疫的重 要组成 部分, 它 具有吞噬和消灭病原微生物的作用。研究发现, 太湖 鳖的白细 胞对嗜 水气单 胞菌的 吞噬百 分率显著 地 高于台湾鳖, 表明台湾鳖对嗜水气单胞菌易感 性较强。众所周知, 嗜水气单胞菌在各养鳖 场水体中 普遍 1期 蔡完其等: 中华鳖太湖群体和台湾群体非特 异性免疫功能比较 97 存在, 是导致穿孔、烂颈、 烂脚、红脖及赤斑等症状的 主要病原。 台湾鳖 引进大陆 时的疲 劳和损 伤、 由于 未经检疫带进新的病原, 以及其本身对嗜水气单胞菌的 较强的易感性, 可能是其在大陆发 病率较高 的原 因之一。 2. 4 太湖鳖的 T 淋巴细胞活性 E 花环百分率比台湾鳖高出 11 8% , 差异虽然欠显著, 但 也在一定 程度 上表明太湖 鳖 T 淋巴细胞的功能稍强。同时, 作者注 意到, 中华鳖 的 T 淋巴 细胞活 性 E 花 环百分率 在 7% 11% 左右, 低于 人、 畜及禽类的 15% 35% [ 9] 。这一方面表明中华鳖 T 淋巴细胞表 面具有红 细胞 受体( E 受体) , 另一方面又表明, 鳖作为爬行类, 同人及各类高等动物在进化上的 差距。 2. 5 太湖鳖的红细胞 C 3b受体花 环比台湾 鳖高出 11 9% , 差异也 不太显著 , 不 过仍反 映了太 湖鳖的 红 细胞对异物的粘附功能略强于台湾鳖。当受到病原微生 物等异 物的侵 害时, 红细胞 对异物 的粘附和 清 除作用是防御发病的重要功能之一。 2. 6 研究补体总量 的经典 试验 方法是, 以 绵羊 红细胞 ( SRBC) 为 抗原, 以溶 血素 ( 抗 SRBC 抗体) 为 抗 体, 将二者结合形成免疫复合物, 激活补体, 溶解 SRBC。然后根据发 生 50% 溶血 时血清的最 小稀释度, 换算出样品的补体总量。这种方法的工 作量较 大, 同时多以 肉眼比 色来判 断 50% 溶 血, 人为 误差也 较 大。本研究的测定方法是在经典方法上作了改进, 虽也 是通过经典途径激活补体, 但是采