口服甘草素对中华鳖稚鳖抗嗜水气单胞菌感染的作用
口服甘草素对中华鳖稚鳖抗嗜水气单胞菌感染的作用内容摘要：
DO I : 10. 13300/j . cnki . hnlkxb. 2000. 06. 015 第 19 卷 第 6 期 华 中 农 业 大 学 学 报 2000 年 12 月 Journal of Huazhong Agricultural University Vol. 19 No . 6 Dec .2000 , 577 ～ 580 口服甘草素对中华鳖稚鳖抗嗜水气 ＊ 单胞菌感染的作用 1) 2) 1) 陈超然 陈晓辉 陈昌福 2) (1)华中农业大学水产 学院 , 武汉 430070 ; 日本国高知大学农学部 , 日本高知 783-0093) 摘要 在 中华鳖(Pelodiscus sinensis)稚 鳖饲 料 中添 加 定量 的 甘草 素 , 投 喂 经福 尔 马 林灭 活 嗜水 气 单胞 菌 (FKC)免疫接种的中华鳖稚鳖 28 d 后 , 通过测定增重 量 , 血液 比容值 , 血清中补 体价 , 抗体价 , 溶 菌酶活性 , GOT 、 GPT 值 , 白细胞的吞噬活性以及活菌攻毒的方法 , 探讨了口服甘草素对中华鳖稚鳖抗 嗜水气单胞 菌感染的 作用 。 结果 表明 , 在中华鳖稚鳖饲料中添加 35 mg kg·d 的甘草 素 , 不 仅具有 提高供 试中华 鳖免疫 应答 水平 , 改善 肝功 能 , 增强抗嗜水气单胞菌感染的能力 , 同时还具有明显的促生长作用 。 关键词 甘草素 ;中华鳖 ;嗜水气单胞菌 中图法分类号 S 947. 1 +2 ;S 942 . 5 甘草(Glycyrriza glabra)是一种常见的中药 , 其主 1 . 2 饲养方法 [ 1] 效成分是甘草素( Glycyrrhizine) 。 现已证明甘草素 在每个 2 . 4 m ×3 . 6 m ×0 . 8 m 的水泥池中放养 具有强肝 , 解毒 , 抑制溃疡发生和预防动脉硬化等多 40 只中华鳖稚鳖 , 以充分曝气的自来水饲养 , 每天 [ 2] 种药理学功能 。 最近的研究结果还证明甘草素具 投喂相当于 中华鳖稚 鳖体重 2 %的人工 配合饲 料 [ 3] 有抗 病毒的辅助功能 , 增强五条 (Seriola quin- (中科院科水公司)。 驯养 12 d 后 , 开始试验 。 queradiate)抗 链 球 菌 (Streptococcus sp . )感 染 的 功 1 . 3 供试菌株及其培养条件 [ 4] 能 , 将其与鱼用疫苗一起使用时 , 还能显示出较强 1997 年 从 患 病 的中 华 鳖 体 内 分 离的 A .hy- [ 5] 的佐剂性 。 drophila ZHBH4 菌株 , 接种在脑心浸液(BHI , Difico) 嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)能引 起中 培养基中 , 28 ℃培养 36 h 后 , 离心法集菌 , 以灭菌生 [ 6] 华鳖 [ Pelodiscus sinensis (Wiegmann)] 多 种 病 症 7 。 理盐水调整菌浓度至 1 . 3 ×10 cells ml , 作为制备菌 由于致病菌抗药性的产生 , 用抗菌素类药物防治中 苗和攻毒用菌液 。 [ 7] 华鳖细菌性疾病的效果越来越差 。因此 , 增强中 1 . 4 甘草素的投喂 华鳖自身免疫系统的功能 , 提高其抗病能力 , 是值得 将辽 宁省 兴京 制药 厂生 产的甘 草素(含量 为 尝试的途径之一 。本研究将甘草素定量添加在饲料 95 %)分别按每天每公斤体重 15 mg 、25 mg 、35 mg 、45 中投喂中华鳖稚鳖后 , 通过测定其特异性和非特异 mg 和 55 mg 的 用量 , 添加 在饲料 中投喂 中华鳖 稚 性免疫活性 , 评价了在中华鳖稚鳖饲料中添加甘草 素的效果 。 1 材料与方法 1. 1 供试中华鳖稚鳖 鳖 , 连续投喂 28 d 。投喂添加甘草素饲料期间的水 温变动在 19 . 3 ～ 26 . 5 ℃之间 。 1. 5 免疫接种 投喂添加甘草素饲料前 1 d , 对每只供试中华鳖 稚鳖经后肢窝注射 0 . 3 ml 福尔马林灭活的 A . hy- 湖北省 黄 石 市花 湖 农 场 渔 场饲 养 的 体 重 为 drophila( formalin killed A . hydrophila ,FKC ) 菌苗 。 (33 . 6 ±3 . 8)g 的健康活泼 、无外伤的中华鳖稚鳖用 1 . 6 采血 于本研究 。 收稿日期 : 2000-05-15 ＊国家自然科学基金资助项目 (批准号 : 39870598) 陈超然 , 女 , 1976 年生, 华中农业大学水产学院在读硕士生 .武汉 430070 自 投喂添加甘草素的饲料后第28d , 从各组中 578 第 19 卷 华中农业大学学报 随机捞取 10 只中华鳖稚鳖 , 采用断头法采血 。 将每 于对照组 。 只中华鳖稚鳖的血液分为 2 份 , 其中一份以肝素抗 表 1 试验中供试中华鳖稚鳖的增重量 1) 凝 , 制备抗凝血 ; 另一份待其在室温下凝固后 , 制备 血清 , 均置于 4 ℃冰箱中备用 。 Table 1 Growth of young Chinese soft-shelled turtle (Pelodiscus sinesis) 1. 7 比容值的测定 组别 开始时体重 结束时体重 Group Initial body Final body mg·kg -1·d -1 weight g weight g 15 35 . 7 53. 2 17 . 5 25 36 . 1 54. 2 18 . 1 1. 9 补体价的测定 [ 8] 参照高田等的方法 测定补体代替途 径的补 35 33 . 4 56. 0 22 . 6 45 35 . 3 56. 7 21 . 4 体价 , 反应温度为 30 ℃。 55 33 . 1 55. 4 22 . 3 1. 10 溶菌酶活性的测定 对照 CK 32 . 8 49. 0 16 . 2 将抗 凝血 装入 经肝素 处理 过的 比容 管(Terumo), 在 22 ～ 25 ℃的室温条件下 , 依常规方法进行 。 1. 8 抗体价的测定 采用血凝板法进行 。 反应抗原为 FKC 。 [ 9] 参照楠田等的方法 , 以溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus) 为基质进行 。 1. 11 GOT 和 GPT 值的测定 [ 4] 参照 枝广 等的 方 法 Gain g 1)45 只供 试中华 鳖稚鳖 的平 均值 Mean value of 45 experimental turt les 表 2 供试中华鳖血细胞比容值 、血清中抗体价 、 , 采用 测定 谷 草转 氨 酶 ( glutamic oxalacetic transaminase enzyme , GOT)和谷丙 转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase enzyme , GPT)专 增重量 补体价和溶菌酶活性 1) Table 2 Hematocrit value in the blood an complement activity , aggl utinating antibody titer , lysozyme activity in serum of young Chinese soft- shelled turtle(Pelodiscus sinensis) 用试剂盒(和光)进行 。 组别 比容值 补体价 Group Hematocrit Complement mg·kg -1 ·d -1 % U·ml -1 killed Straphylococcus aureus , FKS)。 15 49 . 6 ±1. 7 624 ±79 1∶2661) 7. 14±0 . 47 1. 13 攻毒 从各组中捞取 30 只供试中华鳖稚鳖 , 经后肢窝 25 50 . 2 ±2. 1 631 ±82 1∶297 6. 94±0 . 38 35 50 . 4 ±2. 2 599 ±79 1∶245 6. 81±0 . 41 每只注射 0 . 2 ml A . phdrophila 活菌液后 , 饲养观察 45 48 . 6 ±2. 8 623 ±55 1∶256 7. 06±0 . 51 14 d 。对死 亡的中华 鳖稚鳖进 行解剖并 分离致 病 菌 , 以兔抗 A . hydrophila ZHBH4 菌株血清施行玻片 55 49 . 8 ±2. 2 617 ±63 1∶314 6. 68±0 . 26 对照 CK 49 . 9 ±3. 1 622 ±76 1∶165 6. 22±0 . 37 1. 12 白细胞吞噬活性的测定 参照文献[ 10] 的方法进行 , 供白细胞吞噬的菌 体为经福尔 马林 灭活的 金黄 色葡 萄球 菌(formalin 凝集试验 , 判断是否由 A .hydrophila 的感染致死 。 2 结 果 抗体价 Antibody 溶菌酶活性 Lysozyme μg·mg -1 1)为 10 只供试中华鳖稚鳖凝集抗体价 的几何平均值 Number in the parenthses indi cate geometric means of the agglutinating antibody titer of 10 turt les 试验期间各组 中华鳖稚鳖的 增重量如表 1 所 供试中华鳖稚鳖血清中 GOT , GPT 和血液中白 示 。 由表 1 可以看出 , 与对照组相比 , 投喂甘草素的 细胞的吞噬活性测定结果如表 3 所示 。由表 3 可以 中华鳖稚鳖增重量较大 , 而且在各试验组中 , 以投喂 甘草素 35 mg (kg·d)为的试验组中华鳖稚鳖的增重 看出 , 与对照组相比 , 投喂甘草素的中华鳖稚鳖血清 中 GOT 、GPT 值有所下降 , 而血液中白细胞的吞噬活 量最大 。 性则有所升高 。 但是 , 对各试验和对照组中华鳖稚 投喂添加甘草素饲料 28 d 后 , 供试中华鳖稚鳖 鳖的 GOT 、GPT 和吞噬活性检测值均未出现显著差 血细胞的比容值 , 血清中抗体价 , 补体价和溶菌酶活 性的测定结果如表 2 所示 。 由表 2 可以看出
